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方案概述

前言：

乙基麥芽酚作為一種高效、廣譜的香味增效劑和改良劑，被廣泛應用于食品工業中，以增強和調和食品的甜香、果香及奶香風味。根據我國《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》（GB 2760-2024），乙基麥芽酚被允許在特定食品類別中按生產需要適量使用。然而，由于其能夠顯著掩蓋油脂可能存在的氧化異味并提升口感，近年來在食用植物油（包括大豆油）中違規添加乙基麥芽酚的現象時有發生。因此，建立一種準確、靈敏、高效的分析方法，用于監控大豆油等食用油中乙基麥芽酚的非法添加，對保障食品安全、維護消費者權益和市場規范具有重要的現實意義。

食用植物油中乙基麥芽酚的測定（BJS201708）規定了食用植物油中乙基麥芽酚的液相色譜-串聯質譜定性確證和定量測定方法，適用于芝麻油、芝麻調和油、菜籽油等食用植物油中乙基麥芽酚的確證及測定。

大豆油基質成分復雜，主要含有甘油三酯、游離脂肪酸、磷脂及天然生育酚等物質，這些共存成分在分析過程中極易對目標物乙基麥芽酚的檢測產生嚴重的基質干擾。液相色譜-串聯質譜聯用技術結合了液相色譜卓越的分離能力與串聯質譜高選擇性、高靈敏度的檢測優勢。該技術已成為當前食品中痕量非法添加物分析鑒定的強有力工具。

本應用方案成功驗證皖儀科技LCMS-TQ9200三重四極桿液質聯用系統分析大豆油中的乙基麥芽酚含量的結果。

關鍵詞：三重四極桿液質聯用系統；大豆油；乙基麥芽酚

1.儀器設備及試劑

1.1液相串聯質譜配置清單

表1 儀器配置清單表

序號	名稱	數量
1	LCMS-TQ9200液相色譜串聯質譜系統	1臺
2	P3600B 二元高壓恒流泵	1臺
3	CT3600 柱溫箱	1臺
4	AS3600 超高效自動進樣器	1臺
5	SmartLab CDS 2.0色譜使用工作站	1套
6	BEH C18 1.7 μm 2.1x50 mm	1個

1.2試劑及標準品清單

表2 試劑及標品清單表

序列	試劑及標準品	純度
1	甲醇	LC-MS級
2	甲酸	LC-MS級
3	乙基麥芽酚標準溶液	100 mg/L
4	某品牌大豆油	1 kg

1.3實驗材料及輔助設備

超聲波清洗機；

渦旋混合器；

高速離心機

2.實驗方法

2.1液相方法條件

色譜柱：C18, 1.7 μm 2.1x50mm

流動相：A相：0.1% 甲酸水；B相：0.1% 甲酸甲醇

流速：0.3 mL/min

柱溫：40 ℃

進樣體積：2 μL

2.2前處理方法

準確稱取10g試樣（精確至0.01g）置于50mL聚丙烯離心管中，用移液器準確加入10mL甲醇，渦旋振搖2min，4℃條件下9000rpm/min 離心10 min，將上清液移入20mL具塞刻度試管中，下層油液再用10mL甲醇重復提取一次，合并上清液，用甲醇定容至20mL，經微孔濾膜（0.22 μm，有機相）過濾，供液相色譜-串聯質譜分析。

2.3溶劑配制

2.3.1 乙基麥芽酚標準溶液：100μg/mL，上海安譜實驗科技股份有限公司有限公司購得。

2.3.2 乙基麥芽酚標準系列工作溶液：將乙基麥芽酚標準儲備溶液用甲醇逐級稀釋成 1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL 標準系列溶液，準確稱取與試樣基質相應的陰性試樣10g（精確至0.01g），分別加入標準系列溶液200μL，與試樣同時進行提取，制成最終濃度為12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL 標準系列工作溶液。臨用時配制。

2.3.3 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀釋至1000mL，用濾膜（0.22μm，水相）過濾后備用。

2.3.4 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1mL用甲醇稀釋至1000mL，用濾膜（0.22μm，有機相）過濾后備用。

3實驗結果

3.1標準品譜圖

7分鐘內完成乙基麥芽酚含量的測定，峰形良好，化合物響應良好，符合實驗測定需求。

圖1 乙基麥芽酚色譜圖（250 ng/mL）

3.2線性范圍

取乙基麥芽酚標準溶液，逐級稀釋到系列濃度制作標準曲線，線性范圍12.5~500 ng/mL，線性檢測結果與已知濃度的偏差小于最大允許偏差，R2均大于0.9999，線性關系良好。

表3 化合物線性范圍表

化合物	線性范圍	線性相關系數R²
乙基麥芽酚	12.5~500 ng/mL	0.99997

圖2 化合物線性結果

3.3檢測限與定量限

本方法中乙基麥芽酚在12.5ng/mL信噪比遠大于10。其中當S/N等于10，為理論定量限，S/N等于3，為理論檢出限，經計算，其檢出限為1.07ng/mL，定量限為3.56ng/mL。

表4 化合物定量限與檢出限

化合物	信噪比（S/N）	檢出限（ng/mL）	定量限（ng/mL）
乙基麥芽酚	35.079	1.07	3.56

圖3 化合物定量限色譜圖

3.4精密度

取空白溶劑及陰性試樣加入乙基麥芽酚標準溶液，使其最終濃度為25 ng/mL，連續進樣7針比較精密度；結果如下表所示，乙基麥芽酚RSD均在3%以內，符合標準的≤15%的精密度要求。

表5 化合物精密度

化合物	樣品	偏差RSD
乙基麥芽酚	甲醇加標	2.407%
乙基麥芽酚	大豆油加標	2.915%

圖4 甲醇加標精密度色譜圖

圖5 大豆油加標精密度色譜圖

3.5回收率

取100μg/mL乙基麥芽酚標準溶液，使用大豆油稀釋至25ng/mL，前處理提取后過濾，連續進樣7針比較回收率；結果如下表所示，乙基麥芽酚回收率為102.53%，符合80%-120%的回收率要求。

表6 化合物回收率

化合物	加標濃度(ng/mL)	回收率%
乙基麥芽酚	25	102.53%

3.6空白殘留

取標準曲線最高點500ng/mL后進樣空白試劑，計算其空白殘留未檢出。

圖6 空白殘留色譜圖

3.7樣品測試

取某品牌大豆油經過前處理后進樣，未檢出。

圖7 樣品測試色譜圖

4.結論

本方法使用皖儀科技LCMS-TQ9200液相質譜聯用系統，進行食醋中的甜蜜素測定。由數據可得該方法的各色譜峰峰形良好、無拖尾，靈敏度符合要求，線性相關系數均大于0.9999，精密度在3%以內，加標回收率在85-105%之間，高濃度樣本系統無殘留，說明了該方法配備皖儀科技液相色譜質譜聯用系統滿足對待測樣本的常規性定性定量檢測需求。